抗生素
迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期
蛋白质翻译
A G
0.05/h,1.8g
种子的接种需要在接种环酒精火焰处进行,以避免杂菌污染
121°C,15min
50.5
0.122/h
Gibson组装在一个反应管内通过三个酶协同组装多个片段
工程菌性能
稀释率
培养基浓度
装料体积
工程菌种类
稀释率
培养基浓度
微生物细胞处于停滞期时,细胞数量没有增加或增加很少
细胞处于对数生长期时,生长速率大大加快
发酵过程进入衰亡期后,细胞数量减少
pH值
温度
溶解氧浓度
搅拌转速
实时检测细胞生长的变化,避免生长出现异常
实时检测番茄红素的合成变化,避免菌种退化
注意观察补料瓶,保证补料液充足
注意观察控制面板保证pH、温度、溶氧控制稳定
注意观察发酵罐状态,保证补料和取料平衡,及不发生逃液
实时检测细胞生长的变化,避免生长出现异常
实时检测番茄红素的合成变化,避免菌种退化
注意观察补料瓶,保证补料液充足
注意观察控制面板保证pH、温度、溶氧控制稳定
注意观察发酵罐状态,保证补料和取料平衡,及不发生逃液
发酵培养基需要添加葡萄糖或者甘油等碳源
两种培养基都需要添加Amp抗生素
发酵培养基需要添加IPTG诱导剂诱导合成通路的表达
种子培养基中可多添加一些氮源加快细胞的生长
大肠杆菌菌落呈现红色来源于转入的重组质粒所赋予的番茄红素合成性能
浅色菌落合成番茄红素能力弱, 有些浅色菌株可能是PCR过程中无意造成的突变引起的
多选取深色菌落筛选,容易挑选出最优的合成通路,用做番茄红素的生成菌株
抗性基因
复制起始
多克隆位点
启动子和终止子
番茄cDNA文库
基因合成